本試驗為(wèi)分(fēn)析免疫質(zhì)量，及時掌握流行病學(xué)動态和免疫效果，我公(gōng)司在河北省石家莊市和邢台市選取兩個蛋雞場，對我公(gōng)司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)抗體(tǐ)的血清學(xué)進行連續性的監測，以此掌握我公(gōng)司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株) 抗體(tǐ)消長(cháng)規律、産(chǎn)生時間、抗體(tǐ)高度及持續時間等效果。

1 材料和方法

1.1 供試材料

哈藥集團生物(wù)疫苗有(yǒu)限公(gōng)司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)滅活疫苗。

抗體(tǐ)監測試劑 禽流感H5N1 Re-7株和Re-6株抗原及陽性血清，由中(zhōng)國(guó)農業科(kē)學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供，紅細胞懸液是哈藥集團生物(wù)疫苗有(yǒu)限公(gōng)司質(zhì)量管理(lǐ)部提供的SPF級公(gōng)雞紅血球。

1.2 疫苗效力檢測

取4周齡SPF雞35隻（由哈藥集團生物(wù)疫苗有(yǒu)限公(gōng)司SPF雞場提供），分(fēn)成兩組，一個實驗組，每組20隻，對照組15隻，實驗組注射哈藥集團生物(wù)疫苗有(yǒu)限公(gōng)司禽流感H5亞型二價滅活疫苗，每隻肌肉注射疫苗0.5ml。21日後，實驗組、對照組分(fēn)别采血，分(fēn)離血清，分(fēn)别用(yòng)國(guó)家禽流感參考實驗室提供的針對禽流感病毒Re-6株和Re-7株免疫抗體(tǐ)的2種H5亞型抗原測定HI抗體(tǐ)。

1.3試驗雞群

選擇4周齡未經禽流感疫苗免疫的商(shāng)品蛋雞（海蘭白）在河北省石家莊(A場)和邢台市（B場）兩個蛋雞場（15000羽左右），免疫哈藥集團生物(wù)疫苗有(yǒu)限公(gōng)司禽流感H5亞型二價滅活疫苗。雞群在同一管理(lǐ)條件下進行飼養。

1.4 免疫劑量及方法 按照種雞場提供免疫程序，實驗組于4周齡首免，頸部皮下注射0.3 mL／羽；8周齡二免，胸部肌肉注射0.5 mL／羽。

1.5 HI抗體(tǐ)效價測定 雞群于4周齡（首免當天）、6周齡、7周齡、8周齡(二免當天)、9周齡、10周齡、12周齡、14周齡、17周齡、20周齡、23周齡、26周齡，每組随機選取150隻雞翅靜脈采血，離心制備血清并按照國(guó)家标準紅細胞血凝抑制試驗( HI )進行抗體(tǐ)檢測。

1.6檢測試劑和檢測方法

試驗均用(yòng)國(guó)家标準紅細胞血凝抑制試驗( HI )進行抗體(tǐ)檢測，待檢血清HI抗體(tǐ)滴度大于或等于6log2時為(wèi)抗體(tǐ)合格。 

2 結果

2.1疫苗效力檢驗結果見表1，對照組為(wèi)陰性，免疫雞Re-6株、Re- 7株HI抗體(tǐ)幾何平均滴度（GMT）≥6log2為(wèi)合格産(chǎn)品。

表1 疫苗效力檢測結果（log2）

2.2 石家莊與邢台市兩個蛋雞場免疫疫苗後，均未見明顯不良反應，雞群狀态良好，測定雞群禽流感Re-6株、Re-7株HI抗體(tǐ)效價，并分(fēn)别計算平均值，結果見表2，繪制抗體(tǐ)消長(cháng)折線(xiàn)圖，見圖1、圖2。

表2 禽流感H5N1亞型Re-6株及Re-7株HI抗體(tǐ)效價監測結果（log2）

由圖1、圖2可(kě)見，四周齡雛雞禽流感母源抗體(tǐ)為(wèi)零或極低，首免後2周，A場組、B場組Re-6株、Re-7株抗體(tǐ)效價達到6log2，3周各組均達到首免後的抗體(tǐ)高峰，Re-6株抗體(tǐ)6.9~8log2，Re-7株抗體(tǐ)8~8.4log2。首免高峰後抗體(tǐ)效價出現下降趨勢，于8周齡二免後，三個實驗組抗體(tǐ)效價迅速上升，其中(zhōng)A場組抗體(tǐ)效價上升速度最快，6周後（14周齡）達到二免抗體(tǐ)高峰且峰值最高，Re-6株抗體(tǐ)達到11.6log2，Re-7株抗體(tǐ)達到11.4log2；B場組抗體(tǐ)上升速度、峰值次之，于二免後9周達到抗體(tǐ)高峰。達到峰值後各實驗組抗體(tǐ)效價平穩下降，二免後18周，A場組與B場組Re-6株、Re-7株抗體(tǐ)效價略高于6log2，二免後合格抗體(tǐ)可(kě)持續16~18周。

2.3 抗體(tǐ)顯著性檢驗（t 檢驗）A場與B場采樣點之間差異顯著(P<0.05)，A場與B場差異不顯著（P>0.05）。

3 讨論

雞群HI抗體(tǐ)效價幾何平均數達到4log2可(kě)判定為(wèi)免疫合格，據有(yǒu)關資料，HI抗體(tǐ)效價達到4log2時有(yǒu)保護力，但有(yǒu)時能(néng)分(fēn)離到病毒，當達到5log2以上時，可(kě)完全保護，并且分(fēn)離不到病毒。綜合考慮現地實際與滅活疫苗抗體(tǐ)産(chǎn)生規律，對于商(shāng)品蛋雞，現地應用(yòng)中(zhōng)以6log2作(zuò)為(wèi)抗體(tǐ)合格值及免疫臨界值為(wèi)宜。

在現地應用(yòng)中(zhōng)，個别養殖戶及養殖場不重視禽流感疫苗的免疫，在商(shāng)品蛋雞開産(chǎn)前僅進行一次或兩次重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)免疫，本次試驗由于現地條件限制，僅進行了兩次禽流感疫苗免疫，由實驗數據可(kě)看出，商(shāng)品蛋雞在開産(chǎn)前進行一次免疫，抗體(tǐ)峰值較低且下降較快；若進行兩次免疫，二免合格抗體(tǐ)可(kě)持續16~18周左右，這意味着産(chǎn)蛋雞群在5~6月齡産(chǎn)蛋率上升期及高峰期，HI抗體(tǐ)效價将降至免疫臨界值，如果此時進行加強免疫将對産(chǎn)蛋率産(chǎn)生較大影響。因此根據試驗結果建議商(shāng)品蛋雞在開産(chǎn)前進行三次H5型禽流感疫苗免疫，15~30日齡進行首免，45~60日齡進行二免，開産(chǎn)前進行三免，按照此程序，合格抗體(tǐ)可(kě)較好的保護産(chǎn)蛋高峰期。建議有(yǒu)條件的雞場在産(chǎn)蛋期定期進行禽流感HI抗體(tǐ)監測，根據監測結果及時進行免疫，同時也應做好H9型禽流感疫苗免疫。