針對客戶在使用(yòng)哈藥疫苗布氏菌病試管凝集試驗抗原産(chǎn)品時，總是出現不會操作(zuò)及操作(zuò)不當的問題，導緻試驗結果不理(lǐ)想，現整理(lǐ)了布病試管凝集試驗的操作(zuò)過程，供廣大客戶參考。

一、 實驗前準備

1、 試管的準備

① 把試管浸泡于帶有(yǒu)洗滌劑的溫水中(zhōng)30分(fēn)鍾，浸泡後用(yòng)試管刷将其刷幹淨。先用(yòng)自來水沖洗10遍，再用(yòng)去離子水沖洗1遍。

② 試管沖洗幹淨後倒置于籃子中(zhōng)，等水瀝幹後置幹燥箱中(zhōng)，160℃幹燥3個小(xiǎo)時。

③ 實驗前準備0.5%的石炭酸生理(lǐ)鹽水。

2、試劑的準備

①标準抗原:按照說明書使用(yòng)。使用(yòng)時充分(fēn)搖勻，用(yòng)稀釋液作(zuò)1：20(工(gōng)作(zuò)濃度)稀釋。

②标準陽性血清凍幹品，使用(yòng)前用(yòng)蒸餾水溶解至規定容積。

③标準陰性血清凍幹品，使用(yòng)前用(yòng)蒸餾水溶解至規定容積。

3、被檢血清

①按常規方法采血分(fēn)離血清

血清必須新(xīn)鮮，無明顯蛋白絮凝物(wù)、無溶血和無腐敗氣味。

②運送和保存血清樣品

防止血清凍結和受熱，以免影響凝集價。

二、試驗操作(zuò)過程

1、确定被檢血清的稀釋度

牛、馬、駱駝稀釋用(yòng)1:50,1：100,1：200,1：400(4個稀釋度);豬、山(shān)羊、綿羊和狗用(yòng)1：25,1:50,1:100,1:200(4個稀釋度)。大規模檢疫時也可(kě)用(yòng)2個稀釋度，即牛、馬、駱駝用(yòng)1：50,1：100，豬、山(shān)羊、綿羊和狗用(yòng)1:25,1:50,為(wèi)測定強陽性血清效價，稀釋度可(kě)以增加。

2、稀釋被檢血清—豬、山(shān)羊、綿羊和狗血清的稀釋。

①每份被檢血清用(yòng)4支試管，标記檢驗編号後第I管加1.15 mL稀釋液，第2-4管各加人0.5 m L稀釋液。

②取被檢血清0.1 mL，加人第1管，充分(fēn)混勻後吸棄0.25 mL。

③從第1管中(zhōng)吸取0.5mL加人到第2管，混合均勻後，再從第2管吸取0.5 m L至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去0.5 mL，稀釋完畢。

④從第1至第4管的血清稀釋度分(fēn)别為(wèi)1：12.5,1：25,1：50,1：100。

3、加抗原

将0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀釋好的各血清管中(zhōng)，并振搖均勻，豬、羊或狗的血清稀釋則依次變為(wèi)1 : 25,1 : 50,1 : 100,1：200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變為(wèi)1：50,1：100,1：200,1:400。各反應管反應總量為(wèi)1 mL。

4、設立對照—每次試驗都應設立下列對照。

①陰性血清對照

陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清同。

②陽性血清對照

陽性血清的最高稀釋度應超過其效價滴度，加抗原的方法與被檢血清同。

③抗原對照

在0. 5mL稀釋液中(zhōng)，加0.5 m L抗原(1：20)

5、比濁管的配置

每次試驗均須配制比濁管，作(zuò)為(wèi)判定凝集反應程度的依據，先将抗原(1: 2 0)用(yòng)等量稀釋液作(zuò)一倍稀釋，然後按表1配制比濁管。

                                                                            表 1比 濁 管 的 配 制

6、感作(zuò)（反應）

所有(yǒu)試驗管充分(fēn)震蕩後，置37℃溫箱感作(zuò)20小(xiǎo)時。

7、結果判斷

确定每份被檢血清效價：比照比濁管判讀，出現++以上凝集現象的最高血清稀釋度為(wèi)血清凝集價。

① 結果判定

當陰性血清對照和抗原對照不出現凝集，陽性血清的凝集價達到其标準效價士1個滴度，則證明試驗成立，可(kě)以判定。否則，試驗應重做。

②牛、馬和駱駝于1:100。血清稀釋度，豬、山(shān)羊、綿羊和狗于1:50血清稀釋度出現“++”以上的凝集現象時，被檢血清判定為(wèi)陽性反應。

三、試驗後的處理(lǐ)

1、試管的處理(lǐ)

把所用(yòng)試管必須高壓處理(lǐ)（121℃高壓30分(fēn)鍾），然後用(yòng)自來水徹底洗涮幹淨，再用(yòng)去離子水沖洗，後放置框中(zhōng)瀝幹，幹燥（160℃幹燥3個小(xiǎo)時），保存備用(yòng)。

2、 配置好而未用(yòng)完的抗原及其盛裝(zhuāng)其瓶子的處理(lǐ)

瓶子連其抗原一同高壓滅菌（121℃高壓30分(fēn)鍾），後清洗幹淨以備用(yòng)。

3、 試管架的處理(lǐ)

把試管架上帶有(yǒu)樣品标記的符号用(yòng)無水乙醇徹底清除掉，後用(yòng)自來水把試管架沖洗幹淨，晾幹、保存備用(yòng)。

四、哈藥疫苗布氏菌病試管凝集試驗産(chǎn)品

   規格：

抗原：10 ml/瓶

陽性血清：1.0 ml/瓶

陰性血清： 2.0ml/瓶

包裝(zhuāng)：

5瓶/盒、10瓶/盒、20瓶/盒。

貯藏與有(yǒu)效期：

抗原2～8℃保存，有(yǒu)效期為(wèi)18個月。期滿後測定效價，如果符合标準，可(kě)延長(cháng)6個月。 

陰、陽性血清液體(tǐ)制品2～8℃保存，有(yǒu)效期陽性血清為(wèi)12個月，陰性血清為(wèi)24個月；凍幹制品8℃以下保存，有(yǒu)效期均為(wèi)120個月。